基因敲除單克隆細胞株構(gòu)建技術(shù)原理
CRISPR-Cas9是基于細菌和古細菌適應(yīng)性免疫系統(tǒng)開發(fā)的基因編輯技術(shù)。該系統(tǒng)包含一個可以特異性識別靶DNA序列的gRNA，和一個可以結(jié)合和編輯DNA的Cas9核酸酶，在gRNA的引導(dǎo)下，Cas9蛋白精確識別并切割目標DNA序列。Cas9蛋白中的兩個核酸酶活性位點分別切割靶序列中的兩條鏈［一個核酸酶活性位點作用于一條鏈］，產(chǎn)生雙鏈斷裂（DSB） 。雙鏈斷裂通常通過非同源末端連接（NHEJ）來修復(fù)，在修復(fù)過程中，常常會產(chǎn)生非三倍數(shù)的插入或缺失（indel），導(dǎo)致移碼突變，造成靶基因失活，從而實現(xiàn)基因敲除。
相比于會殘留部分基因功能的RNA干擾技術(shù)，基因敲除可以將基因功能完全消除，所以已經(jīng)被越來越多地用于基因功能研究中。
輝駿生物采用CRISPR-Cas9技術(shù)構(gòu)建的基因敲除單克隆細胞株，可實現(xiàn)對細胞基因組靶位點的永久敲除。
基因敲除單克隆細胞株構(gòu)建技術(shù)優(yōu)勢
非病毒系統(tǒng)的基因遞送：電轉(zhuǎn)法，可實現(xiàn)高效基因遞送且脫靶率低
周期短：不需要進行慢病毒包裝等步驟，實驗周期短，細胞交付快至6周
使用高效的電轉(zhuǎn)設(shè)備，具備更高的電轉(zhuǎn)效率和細胞存活率
優(yōu)化的單克隆細胞篩選方法，陽性率大幅提高，使實驗一步到位
基因敲除單克隆細胞株構(gòu)建實驗流程圖
基因敲除單克隆細胞株構(gòu)建 * 輝駿服務(wù)內(nèi)容
服務(wù)內(nèi)容 | 交付內(nèi)容 | 周期 | 價格
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1. 預(yù)實驗： 細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)測試、抗性篩選測試、單克隆生長測試 |
1、單克隆細胞株：2個T25瓶（10^6個細胞/瓶） 2、結(jié)題報告：質(zhì)粒構(gòu)建、克隆篩選、敲除鑒定等操作和結(jié)果 |
6-10周 |
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2. 正式實驗： gRNA序列設(shè)計、cas9-gRNA載體構(gòu)建、電轉(zhuǎn)細胞、多克隆細胞株篩選、單克隆細胞株篩選、敲除效率驗證、細胞擴大培養(yǎng)和保存 |
基因敲除單克隆細胞株構(gòu)建 * 輝駿服務(wù)優(yōu)勢
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效果保障，不成功不收費 無效全額退款，100%保證目標基因編輯/表達效果 | 效率保障 快至6周即可交付合格細胞株，高效實驗流程 | 售后保障 實驗疑問隨時快速響應(yīng)，專業(yè)技術(shù)團隊全程跟進 |
基因敲除單克隆細胞株構(gòu)建實驗 * 輝駿生物服務(wù)案例
本案例在人HCT116細胞中進行基因編輯，電轉(zhuǎn)后篩選獲得的單克隆細胞，通過PCR和Sanger測序驗證表明，該細胞在sgRNA2和sigRNA3靶位點分別發(fā)生缺失1個堿基的純合突變，可引起移碼敲除。Western-Blot實驗確認了敲除結(jié)果。
Sanger測序結(jié)果圖
Western-Blot檢測結(jié)果圖
輝駿實力
實驗熱線：4006991663
