RNA免疫沉淀（RIP）* 實驗原理

RIP（RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RNA結合蛋白免疫沉淀）是研究體內(nèi) RNA 與蛋白結合情況的技術。

結合了抗體的磁珠或樹脂（Beads）與樣本裂解液孵育，通過”抗原-抗體“之間的免疫作用，誘餌蛋白被吸附在Beads上，與誘餌蛋白結合的RNA，也一起沉淀到Beads上。洗滌去掉未結合的RNA后，再用洗脫液將RNA-蛋白復合物從Beads洗脫下來，便得到RNA免疫沉淀產(chǎn)物。RIP產(chǎn)物既可以用qPCR檢測已知RNA，也可以用二代測序檢測未知RNA。

當沒有合適的誘餌蛋白抗體時，可以通過表達融合了flag標簽的誘餌蛋白，利用flag標簽做免疫沉淀。即細胞過表達Flag-Bait，經(jīng)裂解后與anti-Flag珠子孵育，誘餌融合蛋白與Beads結合，與誘餌融合蛋白互作的RNA“共沉淀”到Beads上，再經(jīng)洗滌、洗脫后做qPCR或NGS測序。

輝駿生物10年科研服務經(jīng)驗，專業(yè)提供分子互作實驗服務，包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術，經(jīng)驗豐富，實驗結果穩(wěn)定、可靠。

我公司自有分子、細胞和質(zhì)譜實驗平臺，能執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線，對微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有充足把控力，對后續(xù)功能分析有獨到見解。

我們不僅會提供專業(yè)的售前方案建議、而且售后技術支持將一直保持到文章發(fā)表，確保您安心進行下游實驗及投稿。

目前，客戶已在Signal Transduction and Targeted Therapy (IF: 52.7）、Journal of Hematology & Oncology (IF: 40.4)、European Heart Journal (IF: 35.7）、Molecular Cancer (IF: 33.9）、Cell Discovery (IF: 33.5）、Nature Methods (IF: 32.1）等高水平期刊成功發(fā)表大量高分文章（點擊查看客戶文獻）。

RNA免疫沉淀（RIP）* 實驗流程

RIP實驗，RNA結合蛋白免疫共沉淀，RIP-seq檢測實驗.jpg
內(nèi)源蛋白的RNA免疫共沉淀流程圖

RIP-qPCR，rip技術實驗，rip實驗外包.jpg

標簽融合蛋白的RNA免疫共沉淀流程圖

RNA免疫共沉淀（RIP）* 應用背景

RNA結合蛋白（RNA binding protein，RBP）是一類功能強大而廣泛的調(diào)節(jié)因子，約占細胞編碼的所有蛋白的5%~10%。目前除了少數(shù)RNA以核酶形式單獨發(fā)揮功能，大部分RNA通過與蛋白結合形成RNA-蛋白復合物來發(fā)揮作用。

一方面，RBP參與RNA合成、可變剪接、修飾、轉(zhuǎn)運、翻譯及胞內(nèi)定位等多個轉(zhuǎn)錄后調(diào)控過程，調(diào)控mRNA穩(wěn)定性、lncRNA活性、miRNA沉默復合體形成等生物學過程；另一方面，RNA也會調(diào)節(jié)這些蛋白質(zhì)的活性、定位或與其他蛋白質(zhì)的相互作用，從而影響RBP介導的各種細胞事件。RNA與蛋白質(zhì)的相互作用對于維持細胞穩(wěn)態(tài)是非常重要的，干擾這種相互作用將會導致細胞功能失調(diào)和相關疾病的發(fā)生。

目前研究RNA-蛋白質(zhì)相互作用的方法分為兩大類：一是以感興趣的RNA為中心，尋找與該RNA結合的蛋白質(zhì)；二是以感興趣的蛋白質(zhì)為中心，尋找與該蛋白質(zhì)結合的RNA。RIP（RNA免疫共沉淀）屬于后者，利用特異性的抗體捕獲樣本中的目標蛋白，那么與目標蛋白結合的RNA也一并被捕獲，之后通過qPCR或者測序技術來確定這些結合的RNA。

聯(lián)系技術支持

18927549347、13430303037

RNA免疫共沉淀（RIP）* 輝駿服務內(nèi)容

服務項目	服務內(nèi)容	結果交付	實驗周期	客戶提供	價格
RIP qPCR （驗證型）	Western blot檢測樣本（input）中的誘餌蛋白	Western blot檢測圖	5-6周	實驗樣本誘餌蛋白的IP級抗體實驗信息表（樣本信息，誘餌蛋白序列）	點擊詢價
	RIP調(diào)取誘餌蛋白及其結合的RNA （2組：實驗組和對照組）	誘餌蛋白Western blot檢測圖待測RNA的qPCR檢測數(shù)據(jù) RIP實驗報告
RIP seq （篩選型）	Western blot檢測樣本（input）中的誘餌蛋白	Western blot檢測圖	5-6周	實驗樣本誘餌蛋白的IP級抗體實驗信息表（樣本信息，誘餌蛋白序列）	點擊詢價
	RIP調(diào)取誘餌蛋白及其結合的RNA （2組：實驗組和對照組）	誘餌蛋白Western blot檢測圖 RIP實驗報告
	seq檢測和分析（2組：實驗組和input）	seq檢測結果檢測和分析報告	9周

RNA免疫共沉淀RIP * 樣本要求

樣本類型	RIP-qPCR 建議送樣量	RIP-seq 建議送樣量
動物細胞	3*10e7個細胞/組（約3個10cm皿）	5*10e7個細胞/組（約5個10cm皿）
動物組織	1g/組	2g/組
植物葉片	2g/組	4g/組
植物根或果實	4g/組	8g/組
菌體	50ul菌體沉淀/組	100ul菌體沉淀/組

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實驗和對照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。

保存及運輸：-80℃保存，干冰取樣/運輸，至少在送樣前2天通知我司。

RNA免疫共沉淀RIP * 結果示例

RIP整理圖.jpg

RIP-qPCR：誘餌蛋白western blot檢測圖

Normalized to Input	GAPDH	B基因-引物1	B基因-引物2
Input	1	1	1
IgG_RIP	0.00%	0.00%	0.00%
A蛋白_RIP	0.00%	0.90%	0.78%
Normalized to IgG	GAPDH	B基因-引物1	B基因-引物2
IgG_RIP	1	1	1
A蛋白_RIP	3.053	241.241	314.227

RIP-qPCR：待測基因和內(nèi)參基因檢測數(shù)據(jù)

RIP-IP enrich2.jpg

RIP組相對于IgG組的富集圖

聯(lián)系技術支持

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RNA免疫共沉淀RIP * 客戶服務案例

Han H. et al: Long noncoding RNA PART1 restrains aggressive gastric cancer through the epigenetic silencing of PDGFB via the PLZF-mediated recruitment of EZH2.

Oncogene. 2020. (IF=9.867)

lncRNA PART1通過PLZF介導的EZH2募集導致PDGFB表觀遺傳沉默來抑制侵襲性胃癌

研究概述

以往研究顯示，一種長鏈非編碼RNA(LncRNA)“PART1”在某些癌癥中有抑癌作用，在某些癌癥中又有致癌作用。人類胃癌組織的GEO芯片數(shù)據(jù)顯示，lncRNA PART1在胃癌中顯著下調(diào)，TCGA數(shù)據(jù)庫和GEPIA數(shù)據(jù)庫信息顯示低水平的lncRNA PART1更容易導致腫瘤轉(zhuǎn)移和患者生存期縮短；但其臨床意義和潛在機制尚未明確。本研究發(fā)現(xiàn)的PART1新作用機制是：PART1與AR相互作用，以雄激素非依賴性的模式激活腫瘤抑制因子PLZF，之后PLZF蛋白和EZH2蛋白相互作用，導致PI3K-Akt通路基因PDGFB的啟動子發(fā)生H3K27me3修飾，從而使促癌基因PDGFB的轉(zhuǎn)錄活性受到抑制。

研究路線

細胞、CAM和小鼠實驗均表明PART1水平與胃癌的惡性程度、轉(zhuǎn)移能力呈負相關

RNA-seq實驗發(fā)現(xiàn)高表達的PART1下調(diào)了PI3K-Akt通路的一些基因，上調(diào)了腫瘤抑制基因PLZF，腫瘤組織檢測和TCGA數(shù)據(jù)庫資料確定了該結果

RNA pulldown結合質(zhì)譜鑒走技術首次發(fā)現(xiàn)了PART1的潛在結合蛋白——AR(已有研究表明AR可以激活前列腺瘟中的PLZF并抑制其增殖

RNA pull down WB 和 RIP qPCR實驗確定了PART1與AR的相互作用

ChIP和雙熒光素酶實驗表明AR與PLZF啟動子的2個位點結合，PLZF啟動子因AR、PART1的單獨作用或兩者的協(xié)同作用而激活

數(shù)據(jù)庫調(diào)查和Co-IP結果均顯示PIZF蛋白與EZH2蛋白結合

ChIP-qPCR結果表明PI3K-Akt通路蛋白PDGFB的啟動子與PIZF、EZH2蛋白結合、且該區(qū)域發(fā)生H3K27me3修飾

功能回復實驗表明， PDGFB過表達可以部分回復PART1對GC細胞生長、遷移和侵襲、等能力的抑制

RNA免疫共沉淀RIP * 客戶文章

1. Bao X.C. et al: Capturing the interactome of newly transcribed RNA.Nature Methods,15(3): 213–220. 2018，IF=28.467.
【研究內(nèi)容】：輝駿生物為作者單位之一，和作者共同開發(fā)了一種捕獲鑒定新生RNA結合蛋白的全新方法（RICK）。該方法用EU標記新生RNA，通過點擊反應-生物素-鏈霉親和素系統(tǒng)結合質(zhì)譜分析，分離鑒定RNA互作蛋白。其中，METTL1和CDK1是兩個RICK獨有的RNA結合蛋白。 RIP-qPCR、RIP-Seq、CLIP-Seq等實驗進一步證實了它們與非PolyA RNA的結合，這種結合在細胞分化與增殖中發(fā)揮了重要作用。
使用相關技術：RIP-qPCR、RNA免疫共沉淀RIP-Seq、RNA結合蛋白免疫沉淀技術

2. Bao. X.C. et al: The p53-induced lincRNA-p21 derails somatic cell reprogramming by sustaining H3K9me3 and CpG methylation at pluripotency gene promoters. Cell Research.2015, IF=13.9.

【研究內(nèi)容】：客戶利用RNA pull down、CoIP等技術，發(fā)現(xiàn)lincRNA-p21與HNRNPK結合，并和甲基化酶SETDB1、DNMT1形成復合物，作者通過RIP-qPCR進一步證實了細胞中存在該復合物。該復合物甲基化了多能性基因的啟動子序列及相應組蛋白，并改變了它們的表達量，從而進一步影響體細胞重編程過程。

使用相關技術：RIP seq、RNA結合蛋白免疫共沉淀rip qpcr、質(zhì)譜鑒定

3. Zhang C Y . et al: CircVPRBP inhibits nodal metastasis of cervical cancer by impeding RACK1 O-GlcNAcylation and stability. Oncogene. 2023, IF=8.756.

【研究內(nèi)容】：淋巴結轉(zhuǎn)移是宮頸癌（CCa）患者最惡性的臨床特征之一。本研究利用RNA pull down、RIP和Co-IP等實驗發(fā)現(xiàn)：circVPRBP與OGT酶競爭結合RACK1蛋白，阻礙RACK1-S122位點的O-GlcNAc修飾來使其降解，從而抑制宮頸癌淋巴結轉(zhuǎn)移和淋巴管生成。

使用相關技術：RIP-qPCR、RNA pull down MS、免疫共沉淀Co-IP、質(zhì)譜鑒定

輝駿生物RIP（RNA免疫共沉淀）服務內(nèi)容

1. RIP-qPCR，用于檢測某樣本中的誘餌蛋白和待測RNA是否結合；

2. RIP-seq，用于篩選某樣本中的誘餌蛋白可以結合哪些RNA。

服務項目	服務內(nèi)容	結果交付	實驗周期	客戶提供	價格
RIP qPCR （驗證型）	Western blot檢測樣本（input）中的誘餌蛋白	Western blot檢測圖	5-6周	實驗樣本誘餌蛋白的IP級抗體實驗信息表（樣本信息，誘餌蛋白序列）	點擊詢價
	RIP調(diào)取誘餌蛋白及其結合的RNA （2組：實驗組和對照組）	RIP實驗報告誘餌蛋白Western blot檢測圖待測RNA的qPCR檢測數(shù)據(jù)
RIP seq （篩選型）	Western blot檢測樣本（input）中的誘餌蛋白	Western blot檢測圖	5-6周	實驗樣本誘餌蛋白的IP級抗體實驗信息表（樣本信息，誘餌蛋白序列）	點擊詢價
	RIP調(diào)取誘餌蛋白及其結合的RNA （2組：實驗組和對照組）	RIP實驗報告誘餌蛋白Western blot檢測圖
	seq檢測和分析（2組：實驗組和input）	seq檢測結果檢測和分析報告	9周

聯(lián)系技術支持

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RIP（RNA免疫共沉淀）樣本要求

樣本類型	RIP 建議送樣量	RIP 建議送樣量
動物細胞	3*10e7個細胞/組（約3個10cm皿）	5*10e7個細胞/組（約5個10cm皿）
動物組織	1g/組	2g/組
植物葉片	2g/組	4g/組
植物根或果實	4g/組	8g/組
菌體	50ul菌體沉淀/組	100ul菌體沉淀/組

▲注意：這里列出的均為每組樣本的送樣量，如果實驗和對照組用的樣本一致，此樣本量*2。詳細送樣指南可聯(lián)系輝駿生物客服或銷售索取。

保存及運輸：-80℃保存，干冰取樣/運輸，至少在送樣前2天通知我司。

RNA免疫共沉淀RIP結果示例

Normalized to Input	GAPDH	B基因-引物1	B基因-引物2
Input	1	1	1
IgG_RIP	0.00%	0.00%	0.00%
A蛋白_RIP	0.00%	0.90%	0.78%
Normalized to IgG	GAPDH	B基因-引物1	B基因-引物2
IgG_RIP	1	1	1
A蛋白_RIP	3.053	241.241	314.227

RIP qPCR檢測數(shù)據(jù)

RIP-%input2.jpg

RIP組相對于input組的富集圖（% input）

RIP-IP enrich2.jpg

RIP組相對于IgG組的富集圖

聯(lián)系技術支持

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RIP（RNA免疫共沉淀）服務優(yōu)勢*輝駿生物

十年服務經(jīng)驗，眾多服務案例，服務成果得到優(yōu)秀期刊認可

可對圍繞RNA結合蛋白開展的整體課題提供全方位方案建議

自有分子及細胞生物實驗平臺，能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線

售后技術支持將一直保持到客戶發(fā)表文章，確保客戶安心進行下游實驗及投稿

RIP實驗客戶文章

2. Bao. X.C. et al: The p53-induced lincRNA-p21 derails somatic cell reprogramming by sustaining H3K9me3 and CpG methylation at pluripotency gene promoters. Cell Research.2015, IF=13.9.

使用相關技術：RIP seq、RNA結合蛋白免疫共沉淀rip qpcr、質(zhì)譜鑒定

3. Zhang C Y . et al: CircVPRBP inhibits nodal metastasis of cervical cancer by impeding RACK1 O-GlcNAcylation and stability. Oncogene. 2023, IF=8.756.

使用相關技術：RIP-qPCR、RNA pull down MS、免疫共沉淀Co-IP、質(zhì)譜鑒定

4899+客戶已添加微信獲取實驗優(yōu)惠！

RNA免疫共沉淀試劑盒（RIP試劑盒）信息

名稱

貨號和規(guī)格

產(chǎn)品說明書

價格

Protein G RIP試劑盒

FI8703(動物)，12/24/40次

FI8713(植物)，12/24/40次

Fitgene-FI8703說明書

Fitgene-FI8713說明書

點擊詢價

Protein A/G RIP試劑盒

FI8709(動物)，12/24/40次

FI8719(植物)，12/24/40次

Fitgene-FI8709說明書

Fitgene-FI8719說明書

ChainFree^? Flag-tag RIP試劑盒

FI8704(動物)，12/24次

FI8714(植物)，12/24次

Fitgene-FI8704說明書

Fitgene-FI8714說明書

ChainFree^? HA-tag RIP試劑盒

FI8705(動物)，12/24次

FI8715(植物)，12/24次

Fitgene-FI8705說明書

Fitgene-FI8715說明書

ChainFree^? GFP-tag RIP試劑盒

FI8707(動物)，12/24次

FI8717(植物)，12/24次

Fitgene-FI8707說明書

Fitgene-FI8717說明書

ChainFree^? mCherry-tag RIP試劑盒

FI8708(動物)，12/24次

FI8718(植物)，12/24次

Fitgene-FI8708說明書

Fitgene-FI8718說明書

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RNA免疫共沉淀試劑盒（RIP試劑盒）簡介

RNA免疫共沉淀（RIP）是采用特異性抗體來調(diào)取內(nèi)源性RNA結合蛋白及其結合RNA的技術。分離出的蛋白可以進行western-blot檢測調(diào)取效果，而提取純化的RNA可以利用qPCR（RIP-qPCR）或利用高通量測序（RIP-Seq）方法來檢測。

根據(jù)樣本類型、誘餌蛋白是否攜帶標簽，以及beads類型不同，輝駿生物公司開發(fā)了多款RIP試劑盒，可用于分離不同生物樣本提取物中的目標蛋白及其結合RNA。

當誘餌蛋白不帶標簽時，可以根據(jù)beads的不同選擇protein G 或Protein A/G RIP試劑盒，當誘餌蛋白攜帶標簽時，可以根據(jù)標簽種類的不同選擇ChainFree^?系列試劑盒，該系列試劑盒采用了優(yōu)化并重組表達的、無輕重鏈的標簽抗體磁珠進行RIP實驗。IP復合物無論采用非變性洗脫還是變性洗脫，均不會出現(xiàn)抗體的輕、重鏈污染問題。

Protein G和ProteinA/G RIP試劑盒-輝駿生物產(chǎn)品優(yōu)勢

1、特殊優(yōu)化的beads與抗體親和效率高，抗體用量少；

2、裂解效率高：優(yōu)化的各裂解液體系分別適用于動物、植物或微生物樣本；

3、操作簡便，周期短，適合初學者。

4、品質(zhì)好，實驗結果穩(wěn)定。

5、洗脫液適配后續(xù)qPCR和高通量測序?qū)嶒灐?/span>

RIP試劑盒(rna免疫共沉淀試劑盒)-輝駿生物-價格低大量現(xiàn)貨.png

ChainFree^?系列RIP試劑盒-輝駿生物產(chǎn)品優(yōu)勢

1、無抗體輕重鏈污染：IP復合物無論采用非變性洗脫還是變性洗脫，均不會出現(xiàn)抗體的輕、重鏈污染問題。

2、親和力強：低nM級別親和力，輕松應對低拷貝基因，或難轉(zhuǎn)染細胞系。

3、特異性強：抗體磁珠通過了20株以上的空白細胞系檢測，不易產(chǎn)生非特異吸附。

4、結合量高：每10 μL抗體磁珠可結合約15 μg重組蛋白。

5、兼容性好：無論標簽在誘餌蛋白的N端或C端，都可以識別。

6、穩(wěn)定性好：通過了45℃高溫測試。

RNA免疫共沉淀RIP結果示例

RIP整理圖.jpg

RIP-qPCR：誘餌蛋白western blot檢測圖

輝駿生物RIP試劑盒客戶文章

1. Cai Y.W. . et al: MAP3K1 mutations confer tumor immune heterogeneity in hormone receptor–positive HER2-negative breast cancer. 2024. J Clin Invest. 1區(qū), IF=13.3.

2. AQP3 Influences Unexplained Recurrent Abortion by Regulating Trophoblast Cell Migration and Invasion via the METTL14/IGF2BP1/AQP3/PI3K/AKT Pathway. 2025. J Cell Mol Med. 2區(qū), IF=4.3.

3. Chen R. et al: Lnc-GD2H Promotes Proliferation by Forming a Feedback Loop With c-Myc and Enhances Differentiation Through Interacting With NACA to Upregulate Myog in C2C12 Myoblasts. 2021. Front Cell Dev Biol. 2區(qū), IF=6.684.

4. Yang H.Y. et al: LncRNA FOXD3-AS1 Promotes the Malignant Progression of Nasopharyngeal Carcinoma Through Enhancing the Transcription of YBX1 by H3K27Ac Modification. 2021. Front Oncol.